1、分光光度計(jì)原理

　　大屏幕分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線(xiàn)透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線(xiàn)被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

　　單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比，其關(guān)系為:A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc 式中:A 為吸光度;I。為入射的單色光強(qiáng)度;I 為透射的單色光強(qiáng)度;T 為物質(zhì)的透射率;k 為摩爾吸收系數(shù);L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng);c為物質(zhì)的濃度;

　　物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。

　　2、大屏幕分光光度計(jì)使用方法步驟

　　1)預(yù)熱儀器。為使測(cè)定穩(wěn)定，將電源開(kāi)關(guān)打開(kāi)，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測(cè)定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開(kāi)，使光路切斷。

　　2)選定波長(zhǎng)。根據(jù)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長(zhǎng)。

　　3)固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對(duì)光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動(dòng)靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不再變動(dòng)。一般測(cè)量固定在“1”檔。

　　4)調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí)，比色皿暗箱蓋是打開(kāi)的，光路被切斷，光電管不受光照)。

　　5)調(diào)節(jié)T=。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的*格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=，即表頭指針恰好指在T=處。

　　6)測(cè)定。輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時(shí)表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后，打開(kāi)比色皿暗箱蓋。

　　7)關(guān)機(jī)。實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。

　　3、主要項(xiàng)目對(duì)分析結(jié)果的影響

　　1)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度

　　分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對(duì)應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個(gè)吸收峰的波長(zhǎng)。由于儀器的制造和調(diào)整誤差，單色光的實(shí)際波長(zhǎng)與儀器的波長(zhǎng)讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度，對(duì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是，當(dāng)吸收峰寬度較小，而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直，此時(shí)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。

　　2)透射比(吸光度)準(zhǔn)確度

　　很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

　　3)雜散光

　　雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光，隨著樣品濃度的增加，雜散光的影響也隨之增大，將給分析結(jié)果帶來(lái)一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測(cè)器的靈敏度均明顯減弱，雜散光的影響更不能忽視。因此，雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

　　4、使用與維護(hù)

　　1)若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“”點(diǎn)。然后再測(cè)量。

　　2)指針式儀器在未接通電源時(shí)，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。

　　3)比色皿使用完畢后，請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。

　　4)操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

　　5)WFZ800-DA、756型等分光光度計(jì)，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào)，而不能用來(lái)檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類(lèi)儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，因此在預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開(kāi)比色皿蓋或使用擋光桿，避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。

　　6)放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。

　　7)比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下;分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長(zhǎng)處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至，測(cè)量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。

　　5、大屏幕分光光度計(jì)操作使用過(guò)程中的注意事項(xiàng)

　　1)為了防止光電管疲勞。不測(cè)定時(shí)必須將比色皿暗箱蓋打開(kāi)，使光路切斷，以延長(zhǎng)光電管使用壽命。

　　2)比色皿的使用方法：

　　①拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。

　　②清洗比色皿時(shí)，一般先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。如比色皿被有機(jī)物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1∶2)浸泡片刻，再用水沖洗。不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗比色皿，以免損壞。也不能用毛刷清洗比色皿，以免損傷它的透光面。

　　每次做完實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)立即洗凈比色皿。

　　③比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干，以保護(hù)透光面。

　　④測(cè)定有色溶液吸光度時(shí)，一定要用有色溶液洗比色皿內(nèi)壁幾次，以免改變有色溶液的濃度。另外，在測(cè)定一系列溶液的吸光度時(shí)，通常都按由稀到濃的順序測(cè)定，以減小測(cè)量誤差。

　　⑤在實(shí)際分析工作中，通常根據(jù)溶液濃度的不同，選用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.2～0.7。

　　6、大屏幕分光光度計(jì)操作中容易出現(xiàn)的幾個(gè)典型故障及其排除方法

　　1)儀器不能調(diào)零。可能原因:

　　①光門(mén)不能*關(guān)閉。解決方法:修復(fù)光門(mén)部件，使其*關(guān)閉。

　　②透過(guò)率""旋到底了。解決方法:重新調(diào)整""旋鈕。

　　③儀器嚴(yán)重受潮。解決方法:可打開(kāi)光電管暗盒，用電吹風(fēng)吹上一會(huì)兒使其干燥，并更換干燥劑。

　　④電路故障。解決方法:送修理部門(mén)，檢修電路。

　　2)儀器不能調(diào)""。可能原因:

　　①光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈(盡管燈還亮)。

　　②比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位。

　　③光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法:更換部件。

　　④電路故障。解決方法:調(diào)修電路。

　　3) 測(cè)量過(guò)程中,""點(diǎn)經(jīng)常變動(dòng)。可能原因:

　　①比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。

　　②電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法:送修。

　　4)數(shù)顯不穩(wěn)。可能原因:

　　①預(yù)熱時(shí)間不夠。解決方法:延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因，長(zhǎng)時(shí)間處于工作狀態(tài)時(shí)，也會(huì)工作不穩(wěn))。

　　②光電管內(nèi)的干燥劑失效，使微電流放大器受潮。解決方法:烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑。

　　③環(huán)境振動(dòng)過(guò)大、光源附近空氣流速大、外界強(qiáng)光照射等。解決方法:改善工作環(huán)境。

　　④光電管、電路等其它原因。解決方法:送修。